渗透脆性检测试剂盒(过筛法)，是参与整个生物体基本代谢的中间产物之一，可通过三羧酸循环实现体内糖、脂肪和氨基酸间的互相转化，

丙酮酸在三大营养物质的代谢联系中起着重要的枢纽作用。丙酮酸是糖无氧代谢的产物，科研工作者常将丙酮酸和乳酸一

起研究，并用二者的比值推算循环衰竭的程度。丙酮酸检测可采用乳酸脱氢酶催化法或二硝基苯肼比色法。

雅吉生物丙酮酸检测试剂盒(二硝基苯肼微板法)检测原理是在酸性条件下,丙酮酸与二硝基苯肼反应，

生成丙酮酸-二硝基苯腙复合物，后者经氧化呈棕红色，通过酶标仪测定520nm处吸光度，据此通过与标准曲线对比可以

计算出PA水平。该试剂盒可用于检测植物、细胞或组织、血清等样品中内源性的丙酮酸含量,尤其适用植物样品丙酮酸含量

的检测。该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

三、自备材料：

1、离心管或小试管

2、蒸馏水

3、酶标仪、96孔板

四、操作步骤(仅供参考)：

1、配制组织匀浆液(1×)∶取10ml组织匀浆液(3×)加入20ml蒸馏水即成。

2、配制PA Assay Buffer (1x)∶取10ml PA Assay Buffer (1.5×)加入5ml蒸馏水即成。

3、准备样品︰

①血清、尿液及其他体液样品:血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，尿液通常也可以直接用于测定，-20°C冻存。

②组织样品︰称取1g组织样品置于匀浆器中，再加入1ml组织匀浆液(1x)仔细研磨，振摇提取静置30min ,取上清液4000rpm离心10min ,取上清液,用组织匀浆液(1×)定容至2ml , -20℃冻存，用于PA的检测。

③植物材料︰称取1g植物材料置于匀浆器中，再加入1ml组织匀浆液(1×)仔细研磨，振摇提取,静置30min ,取上清液4000rpm离心10min ,取上清液,用组织匀浆液(1×)定容至2ml , -20℃冻存，用于PA的检测。

④高浓度样品:如果样品中含有较高浓度的PA，可以使用原有的裂解液或PBS等进行稀释，如鸡血清可稀释5～10倍后检测。

4、配制标准品工作液︰如果检测血清、尿液等样品，按取丙酮酸标准(6mg/ml):蒸馏水=1：99的比例配制，使浓度达到60μg/ml，如果检测组织样品按丙酮酸标准(6mg/ml) :组织匀浆液(1×)=1:99的比例配制，使浓度达到60μg/ml。

注意事项:

1、实验材料应尽量新鲜，如取材后不立即使用，应存于-20°C.

2、实验用蒸馏水不能含有二氧化碳，可用新煮沸且冷却后的蒸馏水，并盖紧口。

3、TA滴定液为碱性溶液，有腐蚀性，请小心操作。

4、TA标定液容易长菌，宜4℃保存，一旦发现有絮状物请弃用。

5、果实中含酸量较少时可将TA滴定液适当稀释后使用，可考虑用0.01~0.05M  TA滴定液进行滴定。

6、TA滴定液含量计算公式中，V0最好为3次空白测定的平均值。

7、如果所测样品的浓度过高，应用TA Lysis Buffer工作液稀释样品后重新测定，并将稀释倍数带入公式。

8、如果样品颜色较深，滴定终点不易观察，应采用电位滴定法。

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S0123Rnase A(20mg/ml)

C5023Exonuclease T

C5024Exonuclease VII

C5026Exonuclease III

C5027Endonuclease IV

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