总蛋白(Total Protein,TP)由白蛋白和球蛋白组成，对于生物体液(血清、尿液、脑脊液)中总蛋白质含量的测定，一般要基于

如下两个假设：1、所有蛋白质分子由纯多肽组成，含氮量的质量百分比为16%；2、体液中含有数百个蛋白质分子，

每个分子对测定反应都具有非常相似的特性，目前常用的检测总蛋白的方法有：双缩脲法、紫外分光光度法、染料结合法

、凯氏定氮法、沉淀法等。

总蛋白(双缩脲比吸光度微板法)多用于人或动物血清、血浆、组织等样本中的总蛋白含量测定，双缩脲反应的原理是在呈蓝色的碱性硫酸铜溶液存在

的情况下，肽键与铜离子结合，生成蓝紫色的化合物，此化合物在540nm的吸光度与肽键的数量呈正比例关系，

因此可计算出蛋白质的含量，双缩脲法测蛋白浓度兼容性亦很好，不受大部分样本中其他成分的影响，但易受铜离

子螯合剂的影响，另外对于血清总蛋白的双缩脲分析，脂类、血红蛋白、葡聚糖具有一定干扰作用，

双缩脲法在5～160mg/ml浓度范围内有较好的线性关系。该试剂盒仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

操作步骤(仅供参考)：

1、取内径为8mm的玻璃试管2支，分别加入白陶土-脑磷脂混悬液0.2ml。

2、静脉采血1ml，立即取下针头，沿管壁向各试管注入血液0.5ml，立即混匀并启动秒表计时，并置于37℃水浴中。

3、每隔10s轻摇试管一次，观察管内血液流动情况，直至血液凝固。记录血液凝固所需时间，即为ACT。

4、取2支试管血液凝固时间的平均值作为ACT 值。

计算：参考区间： (1.77±0.76)min

4、配制标准品工作液︰如果检测血清、尿液等样品，按取丙酮酸标准(6mg/ml):蒸馏水=1：99的比例配制，使浓度达到60μg/ml，如果检测组织样品按丙酮酸标准(6mg/ml) :组织匀浆液(1×)=1:99的比例配制，使浓度达到60μg/ml。

注意事项:

1、实验材料应尽量新鲜，如取材后不立即使用，应存于-20°C.

2、实验用蒸馏水不能含有二氧化碳，可用新煮沸且冷却后的蒸馏水，并盖紧口。

3、TA滴定液为碱性溶液，有腐蚀性，请小心操作。

4、TA标定液容易长菌，宜4℃保存，一旦发现有絮状物请弃用。

5、果实中含酸量较少时可将TA滴定液适当稀释后使用，可考虑用0.01~0.05M  TA滴定液进行滴定。

6、TA滴定液含量计算公式中，V0最好为3次空白测定的平均值。

7、如果所测样品的浓度过高，应用TA Lysis Buffer工作液稀释样品后重新测定，并将稀释倍数带入公式。

8、如果样品颜色较深，滴定终点不易观察，应采用电位滴定法。

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