血清中的无机磷(Inorganic phosphorous)主要由H2PO4-和HPO42-两种磷酸根阴离子组成，上述阴离子在在不同的pH环

境下能快速相互转换。在pH7.4血清中两种磷酸根阴离子浓度比例为1:4；在酸中毒环境下二者浓度约为1:1；在碱中毒环

境下二者浓度比例为1:9；在pH4.5尿液中浓度比例为100:1。WHO推荐的常规检测方法为比色法，我国卫生部临检中心

推荐的常规方法为钼蓝比色法和米吐尔钼蓝比色法。

无机磷检测试剂盒(米吐尔钼蓝微板法)是先经提纯蛋白，利用无机磷与钼酸铵结合生成磷钼酸铵，

后者被还原成蓝紫色的复合物，通过酶标仪检测640nm处吸光度，根据公式计算出无机磷含量。本试剂盒仅用

于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

操作步骤(仅供参考)：

1、取内径为8mm的玻璃试管2支，分别加入白陶土-脑磷脂混悬液0.2ml。

2、静脉采血1ml，立即取下针头，沿管壁向各试管注入血液0.5ml，立即混匀并启动秒表计时，并置于37℃水浴中。

3、每隔10s轻摇试管一次，观察管内血液流动情况，直至血液凝固。记录血液凝固所需时间，即为ACT。

4、取2支试管血液凝固时间的平均值作为ACT 值。

计算：参考区间： (1.77±0.76)min

4、配制标准品工作液︰如果检测血清、尿液等样品，按取丙酮酸标准(6mg/ml):蒸馏水=1：99的比例配制，使浓度达到60μg/ml，如果检测组织样品按丙酮酸标准(6mg/ml) :组织匀浆液(1×)=1:99的比例配制，使浓度达到60μg/ml。

注意事项:

1、实验材料应尽量新鲜，如取材后不立即使用，应存于-20°C.

2、实验用蒸馏水不能含有二氧化碳，可用新煮沸且冷却后的蒸馏水，并盖紧口。

3、TA滴定液为碱性溶液，有腐蚀性，请小心操作。

4、TA标定液容易长菌，宜4℃保存，一旦发现有絮状物请弃用。

5、果实中含酸量较少时可将TA滴定液适当稀释后使用，可考虑用0.01~0.05M  TA滴定液进行滴定。

6、TA滴定液含量计算公式中，V0最好为3次空白测定的平均值。

7、如果所测样品的浓度过高，应用TA Lysis Buffer工作液稀释样品后重新测定，并将稀释倍数带入公式。

8、如果样品颜色较深，滴定终点不易观察，应采用电位滴定法。

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