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當(dāng)前位置:首頁(yè)   >  產(chǎn)品中心  >  試劑盒  >  檢測(cè)試劑盒  >  TE0002堿性磷酸酶(ALP)檢測(cè)試劑盒(PNP微板法)

堿性磷酸酶(ALP)檢測(cè)試劑盒(PNP微板法)

簡(jiǎn)要描述:堿性磷酸酶(ALP)檢測(cè)試劑盒(PNP微板法),雅吉生物是一家生物企業(yè)主營(yíng)ATCC細(xì)胞,細(xì)胞系,原代細(xì)胞和培養(yǎng)試劑,重組蛋白,ELISA試劑盒、抗體、熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒

  • 產(chǎn)品型號(hào):TE0002
  • 廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
  • 更新時(shí)間:2024-08-24
  • 訪  問(wèn)  量:71

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詳細(xì)介紹

堿性磷酸酶(Alkaline phosphatase,簡(jiǎn)稱ALP或AKP)為一類磷酸酯酶,廣泛分布于哺乳動(dòng)物組織內(nèi),其活性所需最適pH 9.2~9

.8。此酶主要存在于物質(zhì)交換活躍之處(細(xì)胞膜),如腸上皮和腎近曲小管的刷狀緣、附睪上皮之靜纖毛、肝的毛細(xì)膽管膜以及

微動(dòng)脈和毛細(xì)血管動(dòng)脈部之內(nèi)皮,還見于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基復(fù)合體、吞飲小泡、腸上皮之溶酶體、中性粒細(xì)胞之中性顆粒以及

平滑肌的細(xì)胞膜。


堿性磷酸酶(ALP)檢測(cè)試劑盒(PNP微板法)(Alkaline Phosphatase Colorimetric Assay Kit)采用PNP比色法,其檢測(cè)原理是

Para-nitrophenyl phosphate (pNPP)為一種常用的磷酸酶顯色底物,在酸性條件下,可在堿性磷酸酶的作用下生成

p-nitrophenol;在堿性條件下p-nitrophenol轉(zhuǎn)變成醌式結(jié)構(gòu),呈較深的黃色,產(chǎn)物黃色越深說(shuō)明堿性磷酸酶活性越高,

反之則酶活性越低,通過(guò)比色法(酶標(biāo)儀)測(cè)定400~415nm處吸光度,據(jù)此通過(guò)比色分析就可以計(jì)算出堿性磷酸酶活性水平

,可用于檢測(cè)細(xì)胞或組織的裂解液或勻漿液、血漿、血清、尿液等樣品中內(nèi)源性的堿性磷酸酶活性。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域

,不適用于臨床診斷或其他用途。


操作步驟(僅供參考):

1、取內(nèi)徑為8mm的玻璃試管2支,分別加入白陶土-腦磷脂混懸液0.2ml。

2、靜脈采血1ml,立即取下針頭,沿管壁向各試管注入血液0.5ml,立即混勻并啟動(dòng)秒表計(jì)時(shí),并置于37℃水浴中。

3、每隔10s輕搖試管一次,觀察管內(nèi)血液流動(dòng)情況,直至血液凝固。記錄血液凝固所需時(shí)間,即為ACT。

4、取2支試管血液凝固時(shí)間的平均值作為ACT 值。

計(jì)算:參考區(qū)間: (1.77±0.76)min


4、配制標(biāo)準(zhǔn)品工作液︰如果檢測(cè)血清、尿液等樣品,按取丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)(6mg/ml):蒸餾水=1:99的比例配制,使?jié)舛冗_(dá)到60μg/ml,如果檢測(cè)組織樣品按丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)(6mg/ml) :組織勻漿液(1×)=1:99的比例配制,使?jié)舛冗_(dá)到60μg/ml。

3.jpg

注意事項(xiàng):

1、實(shí)驗(yàn)材料應(yīng)盡量新鮮,如取材后不立即使用,應(yīng)存于-20°C.

2、實(shí)驗(yàn)用蒸餾水不能含有二氧化碳,可用新煮沸且冷卻后的蒸餾水,并蓋緊口。

3、TA滴定液為堿性溶液,有腐蝕性,請(qǐng)小心操作。

4、TA標(biāo)定液容易長(zhǎng)菌,宜4℃保存,一旦發(fā)現(xiàn)有絮狀物請(qǐng)棄用。

5、果實(shí)中含酸量較少時(shí)可將TA滴定液適當(dāng)稀釋后使用,可考慮用0.01~0.05M  TA滴定液進(jìn)行滴定。

6、TA滴定液含量計(jì)算公式中,V0最好為3次空白測(cè)定的平均值。

7、如果所測(cè)樣品的濃度過(guò)高,應(yīng)用TA Lysis Buffer工作液稀釋樣品后重新測(cè)定,并將稀釋倍數(shù)帶入公式。

8、如果樣品顏色較深,滴定終點(diǎn)不易觀察,應(yīng)采用電位滴定法。

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