Equi-phi29 DNA Polymerase试剂是phi29的改造体，并经多次纯化分离而得。在保留了phi29 DNA聚合酶的链置换、连续合成特性（>70kb）的基础上，提高了滚环扩增的反应温度，该酶酶可以在42℃条件下持续的进行DNA合成（而phi29 DNA 聚合酶在此温度下反应活性很低）。

这种高温的反应特性，在以下几个方面对实验有明显的提升：（1）在NGS测序中，其提升了高GC含量、回文结构等复杂模板的延伸能力，使得NGS的覆盖度更均一，降低测序所需深度；（2）高温的反应条件，提升了基因组DNA的WGA产物的合成量，并可以进行变温扩增；（3）降低测序中Gap区域，提升单细胞测序的数据质量和完整度；（4）降低非特异性扩增产物；（5）提升MDA/RCA等实验的扩增性能和特异性。

此外，Equi-phi29 DNA Polymerase仍然具有很强的3’-5’外切酶校读功能，合成的DNA片段保真性高。该酶的外切酶活性较强，因此合成过程中引物需要3’端硫代修饰，以降低外切活性对引物的切割效应。

主要特征

链置换能力

连续合成能力

扩增的高保真性

应用

DNA恒温滚环扩增

需强链置换和DNA连续合成的反应

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高保真快速复制

储存

-20℃可保存3年。

Equi-phi29 DNA Polymerase试剂恒温扩增使用策略及实例展示

应用实例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物组进行的LAMP测试。Bst4.0 SYBR Green试剂可在标准定量PCR仪或恒温荧光仪上进行反应。以体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应25min的检测结果，可以看到检测反应<20min(达平台期)。

应用实例2： 用 LP1002引物组进行的LAMP测试。OG变色法为终点变色策略，在反应结束后，倒置反应管，溶解管盖上染料后，阳性样本呈现出醒目的绿色，阴性表现出橙色，区分明显。且该方法不受样本类型限制，杂质耐受性很好。以体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应20min后检测结果。

应用实例3：A3825-01 红黄变色反应（肉眼观察）

以 体外转录 RNA 为模板，1-6分别为1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC为ddH2O为模板。 上图为加样结束反应起

始前，下图为 65 度反应 30min 后。

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