血清血浆microRNA提取试剂盒含量较组织细胞或外周血低，市面上现有的试剂盒提取血清血浆小RNA的得率普遍较低，因此很难用于后续的

定量检测。新?；蜓逖琺iRNA提取试剂盒通过一步上柱即可获得高纯度miRNA，可在10min左右完成小RNA的提取，

是目前提取小RNA（<200nt）操作步骤简单、重复性最好、小RNA产率最高的方法。使用该试剂盒提取的小RNA

（Small RNA）中，长度在15～200nt范围的RNA在95%以上，基本不含有大RNA和DNA，可直接用于后续的反转录、

Northern 杂交、测序等应用。

组分

名称数量

B1804AB1804B

Serum/Plasma miRNA Reagent15ml60ml

miRNA 吸附柱25套100套

RnaseFree TE Buffer5ml5ml

储存

室温可保存2年。

常见问题

(1) 由于血清血浆中的miRNA含量极低，提取的miRNA浓度通常在5 ng/μl以下，因此难以用常规的NanoDrop测量浓度，建议直接使用10μl进行下游反转录。由于本试剂盒提取的是小RNA，该浓度下的miRNA Copy数足以进行下游检测。

(2) 由于血清血浆中miRNA的含量低，为了获得更可靠的实验数据，建议使用特异性和灵敏度更好的TaqMan探针法进行miRNA的下游检测。本试剂盒提取的miRNA并不限于其它检测方法和用途，包括SYBR Green法检测、二代测序、芯片等检测领域。

(3) 新海基因的D1803血清血浆TaqMan miRNA反转录试剂盒为血清血浆专用，不可用于细胞和组织的miRNA检测实验。使用D1803获得的反转录产物仅可使用本公司的HG TaqMan miRNA qPCR试剂盒（货号：TAPXXXXX）。在使用D1803反转录条件下，应用货号为TAP01511检测内源hsa-miR-16， Ct值通常在24左右。

(4)外源性内参可单独订购cel-miR-39 标准品（货号：B1805），每个样品每次提取cel-miR-39的使用量为50fmol。

(5)抗凝血剂要避免使用含有肝素的凝血管，因为肝素会抑制反转录 (reverse tranion) 和聚合酶 (polymerase) 的反应。

血清血浆microRNA提取试剂盒恒温扩增使用策略及实例展示

应用实例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物组进行的LAMP测试。Bst4.0 SYBR Green试剂可在标准定量PCR仪或恒温荧光仪上进行反应。以体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应25min的检测结果，可以看到检测反应<20min(达平台期)。

应用实例2： 用 LP1002引物组进行的LAMP测试。OG变色法为终点变色策略，在反应结束后，倒置反应管，溶解管盖上染料后，阳性样本呈现出醒目的绿色，阴性表现出橙色，区分明显。且该方法不受样本类型限制，杂质耐受性很好。以体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应20min后检测结果。

应用实例3：A3825-01 红黄变色反应（肉眼观察）

以 体外转录 RNA 为模板，1-6分别为1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC为ddH2O为模板。 上图为加样结束反应起

始前，下图为 65 度反应 30min 后。

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