血清血浆TaqMan miRNA反转录试剂盒采用加A法进行反转录，加A法的反转录效率远高于茎环法，因此，采用该方法可极大

的提高检测灵敏度（原理见图1）。该试剂盒操作简单，仅需要两步即可轻松完成miRNA的cDNA合成，合成的cDNA可用于

所有miRNA的后续定量检测。miRNA反转录完毕后采用特异性的上游引物和接头引物进行PCR扩增，FAM标记TaqMan探针

作为荧光报告基团进行定量检测（原理见图1）。

专用于血清血浆miRNAs分子的反转录试验（不可用于组织和细胞），

转录获得的cDNA产物用于TaqMan定量PCR方法检测miRNAs分子

组分

组分名称数量(25T/100T）

5×TaqMan miRNA RT Solution A65μl/250μl

10×TaqMan miRNA RT Solution B65μl/250μl

10×PS TaqMan miRNA RT Primer65μl/250μl

RNase Free H2O1ml/1mlx2

储存

请置于-20°C，可保存2年；避免反复冻融。

血清血浆TaqMan miRNA反转录试剂盒恒温扩增使用策略及实例展示

应用实例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物组进行的LAMP测试。Bst4.0 SYBR Green试剂可在标准定量PCR仪或恒温荧光仪上进行反应。以体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应25min的检测结果，可以看到检测反应<20min(达平台期)。

应用实例2： 用 LP1002引物组进行的LAMP测试。OG变色法为终点变色策略，在反应结束后，倒置反应管，溶解管盖上染料后，阳性样本呈现出醒目的绿色，阴性表现出橙色，区分明显。且该方法不受样本类型限制，杂质耐受性很好。以体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应20min后检测结果。

应用实例3：A3825-01 红黄变色反应（肉眼观察）

以 体外转录 RNA 为模板，1-6分别为1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC为ddH2O为模板。 上图为加样结束反应起

始前，下图为 65 度反应 30min 后。

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