由于miRNA(microRNA)分子序列较小，仅20nt左右，没有真核生物的Poly(A)尾巴结构，采用传统Oligo dT引物和随机引物很难获得从miRNA到cDNA的反转录产物。目前普遍采用的解决方案有两种：特异性反转录引物（图1A所示）、两步加A法反转录方案（图1B所示）。

本公司开发出一套全新的一步法miRNA反转录试剂盒，基于Peter改良的miR-Q技术，可以对成熟的miRNA同时完成Poly(A)反应和反转录反应，直接获得含有特异性tag和15(T)的cDNA产物（如图2所示）。该方法使得miRNA反转录与mRNA的反转录一样轻松,直接将提取的microRNA与反应缓冲液混合物混合并置于PCR仪上1小时即可获得高浓度的、包含所有miRNA分子的cDNA产物,获得的cDNA产物适合于采用SYBR Green染料法进行RealTime PCR进行定量检测。

一步法miRNA反转录试剂盒恒温扩增使用策略及实例展示

应用实例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物组进行的LAMP测试。Bst4.0 SYBR Green试剂可在标准定量PCR仪或恒温荧光仪上进行反应。以体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应25min的检测结果，可以看到检测反应<20min(达平台期)。

应用实例2： 用 LP1002引物组进行的LAMP测试。OG变色法为终点变色策略，在反应结束后，倒置反应管，溶解管盖上染料后，阳性样本呈现出醒目的绿色，阴性表现出橙色，区分明显。且该方法不受样本类型限制，杂质耐受性很好。以体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应20min后检测结果。

应用实例3：A3825-01 红黄变色反应（肉眼观察）

以 体外转录 RNA 为模板，1-6分别为1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC为ddH2O为模板。 上图为加样结束反应起

始前，下图为 65 度反应 30min 后。

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