T4 RNA连接酶1(ssRNA)试剂为热稳定的DNA/RNA连接酶，不依赖于ATP，可催化单链DNA或单链

RNA的分子内环化?；坊从χ?，要求催化底物单链DNA/RNA具有5’-磷酸基团和3’-OH基团。对于大于15nt的单链底物，

该酶均能高效的连接。

组分

组分名称数量

ssDNA/RNA CircLigase (100 U/μl)20 μl/200 μl

10×CircLigase Buffer500 μl

50 mM MnCl2250 μl

活性定义

65°C 1h条件下，催化1pmol 5’-磷酸化的ssDNA底物环化，所需的酶量定义为1U。

储存

-20℃可保存3年。

T4 RNA连接酶1(ssRNA)试剂恒温扩增使用策略及实例展示

应用实例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物组进行的LAMP测试。Bst4.0 SYBR Green试剂可在标准定量PCR仪或恒温荧光仪上进行反应。以体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应25min的检测结果，可以看到检测反应<20min(达平台期)。

应用实例2： 用 LP1002引物组进行的LAMP测试。OG变色法为终点变色策略，在反应结束后，倒置反应管，溶解管盖上染料后，阳性样本呈现出醒目的绿色，阴性表现出橙色，区分明显。且该方法不受样本类型限制，杂质耐受性很好。以体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应20min后检测结果。

应用实例3：A3825-01 红黄变色反应（肉眼观察）

以 体外转录 RNA 为模板，1-6分别为1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC为ddH2O为模板。 上图为加样结束反应起

始前，下图为 65 度反应 30min 后。

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