pCold-SUMO-10His原核蛋白表达试剂盒pCold-SUMO-10His)是在pCold-SUMO载体基础上改造而成，该载体启动子(CS Promoter)来源于南极嗜冷细菌，

在低温下(15度)才能启动蛋白的表达。低温下细菌生长缓慢，使得蛋白合成速度减慢，从而最大限度的提高了蛋白正确折叠的

几率，提高了蛋白可溶性表达，增强了活性蛋白的表达比率。该表达系统所包含的SUMO tag可以极大地提高小分子量蛋白的

表达量，而且能进一步提高蛋白的可溶表达几率。另外，TEE信号肽可增强冷启动子调控下目的蛋白的高表达。

升级后的pCold-SUMO-10His载体，其SUMO蛋白标签含有10个组氨标签（10His tag），使其结合Ni-NTA的能力更强。

与较早版本的pCold-SUMO表达系统相比，pCold-SUMO-10His表达系统在保留了原有系统的蛋白可溶性生产能力、

高特异性剪切能力的情况下，显著提高了与Ni-NTA的结合能力。通过与Ni-NTA结合能力的提高，在以下三个方面改善了

生产重组蛋白的性能：

（1）提高了粗蛋白样品中目标蛋白的捕获能力，从而提高纯化产量；

（2）在蛋白纯化过程中可以使用更高浓度的咪唑进行漂洗，去杂蛋白的能力明显提升，从而获得更高纯度的重组蛋白；

（3）在重组蛋白酶切去除SUMO标签后，利用Ni-NTA去除SUMO标签更为，获得纯度更高的无标签目标蛋白。组分

组分名称数量保存

pCold-SUMO-10His Vector (200 ng/μl)50 μl-20℃

pCold-SUMO-10His-Positive Plasmid (20 ng/μl)20 μl

SUMO Protease (10 U/μl)100 μl

10×SUMO Buffer1 ml

rTEV Protease (10 U/μl)100 μl

20×rTEV Buffer1ml

1700X氯霉34mg/ml）1 ml

200X L-阿拉伯糖（100mg/ml）1 ml

1000X四环素（2mg/ml）1 ml

E.coli Transfer Reagent1.2 ml

Lyophilized Arctic (DE3) competent cells（10T)1瓶

Lyophilized BL21(DE3)Chaprone competent cells (10T)1瓶

主要特征

冷启动子，低温诱导表达，最大限度地提高蛋白地可溶性

分子伴侣可协助蛋白的正确折叠

可大大的提高蛋白表达量

两种宿主菌和两种蛋白酶可选，使实验方案更加灵活

应用

包涵体蛋白的最佳解决方法，提高蛋白的可溶性优化表达。

pCold-SUMO-10His原核蛋白表达试剂盒恒温扩增使用策略及实例展示

应用实例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物组进行的LAMP测试。Bst4.0 SYBR Green试剂可在标准定量PCR仪或恒温荧光仪上进行反应。以体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应25min的检测结果，可以看到检测反应<20min(达平台期)。

应用实例2： 用 LP1002引物组进行的LAMP测试。OG变色法为终点变色策略，在反应结束后，倒置反应管，溶解管盖上染料后，阳性样本呈现出醒目的绿色，阴性表现出橙色，区分明显。且该方法不受样本类型限制，杂质耐受性很好。以体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应20min后检测结果。

应用实例3：A3825-01 红黄变色反应（肉眼观察）

以 体外转录 RNA 为模板，1-6分别为1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC为ddH2O为模板。 上图为加样结束反应起

始前，下图为 65 度反应 30min 后。

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