南极热敏UDG高浓度试剂是来源于嗜冷海洋细菌经大肠杆菌表达纯化的的重组蛋白，又称南极热敏UDG。该热敏UDG酶能有效地水解单链或双链 DNA 上的尿嘧，产生的缺嘧啶位点，在高温或高 pH 下，极易水解断裂。该热敏UDG酶对RNA无活性，主要用于PCR扩增产物的防污染。大肠杆菌来源的尿嘧-DNA 糖基化酶较为耐热，经95℃10min处理仍会残留有少量的尿嘧-DNA 糖基化酶活性，导致含有dU碱基的PCR产物的降解。而来源于嗜冷海洋细菌的热敏UDG在50℃ 5min即失活，在进行PCR扩增前，在PCR混合液中添加尿嘧-DNA 糖基化酶（热敏性），25℃ 2min即可消除PCR产物的残留污染，由于尿嘧-DNA 糖基化酶（热敏性）在PCR循环的94℃变性一步便可被灭活，因此不会影响新的含dU的PCR产物。

应用

去除单链或双链DNA中的尿嘧碱基

去除 PCR 残存污染

活性定义

在标准反应体系下，37°C每分钟催化60 pmol 尿嘧从含尿嘧的双链DNA上释放所需要的酶量为一个活性单位。

反应buffer

ThermoLabile Uracil DNA Glycosylase (UDG)与绝大多数的PCR 聚合酶反应缓冲液都是兼容的，但在高离子浓度(>100mM)下活性会受到抑制。

酶保存液

20 mM Tris-HCl, 50 mM NaCl, 1 mM DTT, , 50% Glycerol, 0.1% (w/v) Triton X-100, pH 7.5。

储存

-20℃可保存2年。

热失活

50℃，5min。

南极热敏UDG高浓度试剂恒温扩增使用策略及实例展示

应用实例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物组进行的LAMP测试。Bst4.0 SYBR Green试剂可在标准定量PCR仪或恒温荧光仪上进行反应。以体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应25min的检测结果，可以看到检测反应<20min(达平台期)。

应用实例2： 用 LP1002引物组进行的LAMP测试。OG变色法为终点变色策略，在反应结束后，倒置反应管，溶解管盖上染料后，阳性样本呈现出醒目的绿色，阴性表现出橙色，区分明显。且该方法不受样本类型限制，杂质耐受性很好。以体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应20min后检测结果。

应用实例3：A3825-01 红黄变色反应（肉眼观察）

以 体外转录 RNA 为模板，1-6分别为1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC为ddH2O为模板。 上图为加样结束反应起

始前，下图为 65 度反应 30min 后。

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